KIF5B

近期，中国科学院上海药物研究所徐石林团队和暨南大学药学院张章副研究员合作，开发了一类RET PROTAC降解剂，对RET溶剂前沿突变耐药有效，细胞活性显著优于抑制剂；相关工作以“Discovery of an Efficacious RET PROTAC Degrader with Enhanced Antiproliferative Activity Against Resistant Cancer Cells Harboring RET Solvent-front Mutations”为题发表在药物化学TOP期刊Journal of Medicinal Chemistry上。  RET是一种跨膜受体酪氨酸激酶，其信号传导通过胶质细胞系来源的神经营养因子（GDNF）家族配体与其受体结合来介导。RET的基因融合和突变与多种癌症密切相关，例如在60%的甲状腺髓样癌、10%-20%的甲状腺乳头状癌以及1%-2%的非小细胞肺癌中均有发现。因此，RET被视为人类癌症治疗的潜在靶点。 过去几十年中，研究人员开发了多种RET小分子抑制剂。第一代多靶点激酶抑制剂（如Vandetanib和Cabozantinib）因脱靶相关的毒副作用以及守门员突变（V804M/L）引发的耐药性而在临床应用中受到限制。第二代RET抑制剂Selpercatinib和Pralsetinib，通过提高选择性并增强对V804M/L突变的抑制活性，显著提升了安全性和有效性，现已获FDA批准用于治疗非小细胞肺癌和甲状腺癌。然而，这些选择性RET抑制剂对溶剂前沿G810突变导致的耐药性仍然束手无策，推动了第三代RET抑制剂的研发。因此，作者探索了一种新的替代策略，旨在克服溶剂前沿突变引起的选择性RET抑制剂耐药问题。 作者以第二代选择性RET抑制剂Selpercatinib为基础，设计并合成了一系列RET PROTAC降解剂。通过分析Selpercatinib与RET激酶域的共晶结构（PDB ID: 7JU6），发现其吡唑并[1,5-a]吡啶母核6位的2-羟基-2-甲基丙氧基暴露于溶剂区域。结合已有的构效关系数据，作者将该基团替换为吡唑基团，并将其作为连接手柄（图1）。随后，作者对连接链进行优化，最终筛选出具有强效降解活性和抗细胞增殖活性的RET PROTAC降解剂20（QZ2135）。  图1：针对RET的PROTAC降解剂的设计 作者首先对化合物20的降解活性进行了表征，结果显示其能够在Ba/F3-KIF5B-RET细胞中高效降解RET蛋白（DC50 = 4.7 nM，Dmax = 83%）（图2）。随后，在表达RET融合蛋白的人类肺腺癌细胞系LC-2/ad中评估其降解活性，结果表明化合物20同样能够有效诱导RET蛋白降解（图3）。此外，作者还对化合物20进行了蛋白降解动力学研究、RET蛋白稳定性分析以及洗脱实验，这些结果进一步证实化合物20是一种高效且作用快速的RET PROTAC降解剂。  图2：化合物20的降解活性表征  图3：化合物20在LC-2/ad细胞中对RET蛋白水平的影响 作者进一步验证了化合物20的降解机制。通过Selpercatinib、MLN4924、MG132、Lenalidomide和阴性对照物26等竞争性实验，表明其通过泛素-蛋白酶体系统介导RET蛋白的降解（图4）。  图4：化合物20的降解作用机制 作者评估了化合物20在携带RET耐药突变的Ba/F3细胞中的降解活性（图5）。结果显示，化合物20不仅对RET V804M突变具有较高的降解活性（DC50 = 17.2 nM），还能够有效降解溶剂前沿突变RET G810C（DC50 = 73.8 nM）。  图5：化合物20在携带耐药突变的Ba/F3细胞中介导的RET降解 在细胞增殖抑制实验中（图6），化合物20在携带溶剂前沿突变的Ba/F3-KIF5B-RET-G810C/R/S细胞中表现出有效的抗增殖活性，其IC50值分别为0.05μM、0.15μM和0.09μM，相较于Selpercatinib分别提升约14倍、7倍和6.3倍。此外，化合物20在这些突变细胞系中的抑制活性也明显优于其阴性对照化合物26。这一结果表明，化合物20作为PROTAC降解剂的作用机制，可能是其抗增殖活性优于传统RET抑制剂的关键原因。  图6：化合物对携带不同RET融合蛋白和耐药突变的Ba/F3细胞的抗增殖活性 此外，在细胞水平上，化合物20相比于Selpercatinib，对携带溶剂前沿突变G810C/R的RET磷酸化表现出更强的抑制活性（图7）。此外，化合物20还能够以剂量依赖的方式诱导Ba/F3-KIF5B-RET-G810C细胞发生凋亡（图8）。  图7：化合物20在携带KIF5B-RET融合蛋白和耐药突变的Ba/F3细胞中对RET磷酸化及下游信号传导的抑制作用  图8：化合物20在Ba/F3细胞中诱导的凋亡 鉴于化合物20在体外的优异表现，作者进一步评估了其在体内的抗肿瘤疗效。利用Ba/F3-KIF5B-RET-G810C异种移植小鼠模型，作者每天对小鼠腹腔注射化合物20（10 mg/kg或30 mg/kg）。14天后，化合物20有效抑制了肿瘤生长，其中在30 mg/kg剂量下的肿瘤生长抑制率为49.2%。在整个治疗过程中，与对照组相比，小鼠未出现显著的体重变化（图9）。此外，作者进一步检测了连续三天腹腔注射化合物20后，小鼠肿瘤组织中RET蛋白的水平。结果显示，化合物20在10 mg/kg和30 mg/kg剂量下分别诱导了47.0%和55.3%的RET蛋白降解。这些结果充分证明了化合物20的体内有效性和良好的安全性。  图9：化合物 20 在 Ba/F3-KIF5B-G810C 细胞异种移植小鼠模型中的体内抗肿瘤疗效。 本研究利用PROTAC靶向蛋白降解技术，成功设计并鉴定出一种高效的RET PROTAC降解剂——化合物20，为克服由溶剂前沿突变引发的RET抑制剂耐药性提供了一种替代策略。 本论文通讯作者为中国科学院上海药物研究所徐石林研究员和暨南大学张章副研究员，共同第一作者分别为南京中医药大学硕士生张倩、暨南大学硕士生何颖祺和中国科学院上海药物研究所博士生饶丹妮。 声明：发表/转载本文仅仅是出于传播信息的需要，并不意味着代表本公众号观点或证实其内容的真实性。据此内容作出的任何判断，后果自负。若有侵权，告知必删！ 长按关注本公众号  粉丝群/投稿/授权/广告等 请联系公众号助手 觉得本文好看，请点这里↓

点击蓝字 关注我们 RET基因位于染色体10q11.2上，该基因变异会影响多个系统功能。已明确RET重排和RET点突变与肿瘤发生相关，非小细胞肺癌（NSCLC）中的RET变异以重排为主，这一患者人群经传统治疗获益有限，2020年新型高选择性RET抑制剂普拉替尼（Pralsetinib，BLU-667）和塞普替尼（Selpercatinib，LOXO-292）的相继获批和应用打破了RET重排阳性NSCLC靶向治疗的僵局，并在国内外NSCLC诊疗指南中被推荐1-3。鉴于RET重排在NSCLC中较少见，RET抑制剂在中国真实世界应用的疗效和安全性尚需更多证据。 2024年11月19日，中国医学科学院肿瘤医院王燕/徐海燕教授团队在BMC Cancer发表了题为“Efficacy and safety of RET-TKI in advanced RET-rearranged non-small cell lung cancer in China: a real-world retrospective chart review”的重要研究4。该回顾性研究纳入了真实世界中接受RET酪氨酸激酶抑制剂（RET-TKI）治疗的局部晚期或转移性NSCLC患者。结果表明，RET-TKI在中国真实世界应用中具有良好的疗效和安全性，应被视为RET重排NSCLC患者一线治疗的首选方案。 研究内容 肺癌是中国最常见、最致命的恶性肿瘤之一，每年都会造成巨大的健康威胁和经济损失。靶向治疗已深刻改变了NSCLC的治疗格局，对经过检测的携带驱动基因变异的患者进行靶向治疗，包括2012年首次在NSCLC中被发现的RET基因。RET重排在NSCLC中的发生率为1%-2%，KIF5B已被确定为主要的上游伴侣基因，占所有融合伴侣基因的70%以上，其次是CCDC6和NCOA4。 在特异性酪氨酸激酶抑制剂或免疫检查点抑制剂研发出来之前，RET重排晚期NSCLC的治疗策略曾一度局限于铂类化疗。一项纳入165例RET重排的NSCLC患者的全球多中心研究显示，一线铂类化疗的客观缓解率（ORR）为49%，中位无进展生存期（PFS）为6.4个月。此外，在一项回顾性研究中发现，与其他化疗方案相比，含培美曲塞的方案可延长PFS，且总生存期（OS）有获益的趋势。近年来，免疫治疗已成为晚期NSCLC的重要治疗方法。根据几项小规模回顾性研究，免疫治疗在RET重排的NSCLC患者中的作用仍存在争议，中位PFS（mPFS）从2.1-7.6个月不等，ORR从6.3%-37.5%不等。然而，考虑到免疫治疗与RET靶向治疗联合应用可能引起免疫相关不良事件（AE），在中国专家共识中未将免疫治疗列为RET重排NSCLC患者的优先选择。 非选择性多激酶抑制剂（MKI）在RET重排NSCLC患者中疗效不佳，这可能是由于该人群的药代动力学特征不佳或入组的患者既往已接受大量治疗。另一方面，RET特异性抑制剂，如普拉替尼（BLU-667）和塞普替尼（LOXO-292），已被证实能诱导持久的临床缓解，并已被NMPA批准用于RET重排晚期NSCLC患者的一线治疗。然而，有关RET特异性抑制剂在中国真实世界中的疗效和安全性的数据十分有限。因此，有必要补充RET特异性抑制剂在真实世界中治疗RET重排NSCLC的临床疗效，并为中国本土临床医生提供更多建议。 该回顾性研究纳入了真实世界中接受RET酪氨酸激酶抑制剂（RET-TKI）治疗的RET重排局部晚期或转移性NSCLC患者。研究共纳入51例患者。RET-TKI在一线治疗中诱导的ORR为73.1%，mPFS为22.7个月（95%CI，11.7-33.7）。二线和后线治疗的ORR和mPFS分别为58.3%和17.7个月（95%CI，9.1–26.2），55.6%和14.7个月（95%CI，12.6–16.8）。不同治疗线之间的ORR（P=0.534）或PFS（P=0.795）无显著差异。 在一线治疗中，与其他方案（包括化疗、多激酶抑制剂和其他无化疗的全身方案）相比，RET-TKI可显著延长患者的PFS（P<0.05）。ECOG体能状态不佳与PFS较差相关（P=0.018）。最常见的≥3级AE为中性粒细胞计数下降（11.4%）和贫血（11.4%）。未观察到新的AE或5级AE。脑转移是治疗失败最常见的形式之一，基线脑转移患者颅内ORR为50%，DCR为100%。 在真实世界中，RET-TKI对RET重排晚期NSCLC患者具有良好的疗效和安全性，优于其他治疗策略（如一线化疗方案）。在后线治疗中使用RET-TKI可能也会带来相应的临床益处。值得注意的是，由于颅内进展的风险相当大，即使在RET-TKI治疗期间也应仔细监测脑转移情况。 参考文献： 1. 中国抗癌协会肿瘤精准治疗专业委员会, 中华医学会杂志社肺癌研究协作组, 中国临床肿瘤学会非小细胞肺癌专家委员会. 晚期RET融合阳性非小细胞肺癌诊疗中国专家共识(2023版)[J]. 中华肿瘤杂志, 2023, 45(12):991-1002. 2. 中国临床肿瘤学会指南工作委员会. 中国临床肿瘤学会(CSCO)非小细胞肺癌诊疗指南(M). 北京:人民卫生出版社, 2024. 3. NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology: Non-Small Cell Lung Cancer (Version 11. 2024) 4. Lei S, Tian L, Yang L, et al. Efficacy and safety of RET-TKI in advanced RET-rearranged non-small cell lung cancer in China: a real-world retrospective chart review. BMC Cancer. 2024 Nov 19;24(1):1427.  声明：本文由“肿瘤界”整理与汇编，欢迎分享转载，如需使用本文内容，请务必注明出处。 编辑：lagertha 审核：松月

【导读】致癌RET改变是多种癌症中重要的、与组织无关的治疗靶点。团队在RET突变的实体瘤患者中对SY-5007进行了首次人体1期研究，SY-5007是一种有效的选择性RET抑制剂。在116例疗效可评估的患者中，总客观缓解率（ORR）为57.8%，初治患者为70.0%，既往接受过治疗的患者为51.3%。中位无进展生存期（PFS）为21.1个月。无论肿瘤类型和既往治疗如何，均观察到疗效。 2024年11月4日，同济大学附属上海市肺科医院周彩存团队在期刊《Signal Transduction and Targeted Therapy》上发表了题为“First-in-human, phase 1 dose-escalation and dose-expansion study of a RET inhibitor SY-5007 in patients with advanced RET-altered solid tumors”的研究论文。研究结果表明，SY-5007耐受性良好，并在RET突变的实体瘤患者中显示出有希望的疗效。连续ctDNA监测可能会揭示治疗反应和潜在的耐药机制。 https://www.nature.com/articles/s41392-024-02006-9 RET与非小细胞肺癌   01  转染过程中的REranked（RET） 基因编码，是一种重要的跨膜受体酪氨酸激酶，该激酶在各种生理过程中起着至关重要的作用。通过体细胞基因改变（例如，融合和激活突变）对RET的失调，可导致其组成型激活，从而导致下游信号转导激活增强。这种持续激活过度激活下游信号传导，促进不受控制的细胞生长、对细胞凋亡的抵抗，并最终导致肿瘤发生和转移。 在非小细胞肺癌（NSCLC）中，大约1-2%的病例发现RET融合。这些融合通常是由于RET基因与其他基因（如KIF5B、CCDC6和NCOA4）并列而产生的，从而产生具有组成型激酶活性的融合蛋白。这种持续激活促进了细胞增殖、存活和侵袭的增加，导致RET融合阳性NSCLC的侵袭性。这种融合标志着一种独特的分子亚型，与不良临床结局和侵袭性肿瘤行为相关。 SY-5007是一种新型的ATP竞争性小分子抑制剂，选择性靶向RET。SY-5007的强抑制效力、广谱RET抑制和高选择性，表明它可以增强RET抑制效果，同时最大限度地减少脱靶毒性，并克服早期治疗观察到的耐药机制。SY-5007的开发可以拓宽治疗选择，为RET突变的肿瘤患者，提供一种新的有效治疗途径并改善临床结果。在这项研究中，团队介绍了SY-5007在RET突变实体瘤患者中的安全性、耐受性和初步抗肿瘤活性，这些研究来自一项首次人体、多中心、开放标签、1期剂量递增和剂量扩展研究。 安全性  02  在数据截止日期，所有患者都接受了至少1剂SY-5007。未观察到剂量限制性毒性（DLT），未达到最大耐受剂量（MTD）。共有96.7%（118/122）的患者经历了至少1次治疗相关不良事件（TRAE）。发生率≥50%的TRAEs ，包括天冬氨酸氨基转移酶升高（AST，69.7%）、丙氨酸氨基转移酶升 （ALT，56.6%）、腹泻（54.1%）和中性粒细胞减少症（54.1%），所有这些都可以通过适当停止治疗来逆转。57.4%（70/122）的患者发生≥3级TRAE。最常见的≥3级TRAEs（发生率≥5%）是高血压（22.1%）、腹泻（16.4%）、高甘油三酯血症（6.6%）和中性粒细胞减少症（6.6%）。 分别在56例（45.9%）和29例（23.8%）患者中，观察到TRAE诱导的剂量中断和减少。导致剂量中断的最常见TRAEs（发生率≥5%）是高血压（12.3%）和腹泻（10.7%）。高血压（5.7%）是剂量减少的主要原因。2例（1.6%）患者因1例药疹和1例外周动脉血栓形成而停药。13例（10.7%）患者发生治疗相关的严重不良事件（TRSAE），未报告与治疗相关的死亡。 1期试验中，接受SY-5007的患者最常见的TRAEs（≥15%） 疗效  03  在64例可评估的NSCLC患者中，SY-5007的ORR为64.1%（41/64，95%CI 51.1-75.7%）和96.9%的DCR（62/64，95%CI 89.2-99.6%）。中位TTR为2.75个月（95%CI 1.01-2.89），中位DoR为13.0个月（95%CI 9.26-NE）。中位PFS为15.4个月（95%CI 10.1-NE），26.6%的患者出现进展或死亡。估计的6个月和12个月PFS率，分别为89.6%（95%CI 78.2-95.2%）和67.5%（95%CI 48.3-80.8%）。SY-5007在初治和既往治疗患者中均表现出显著的抗肿瘤疗效，ORR分别为71.4%（20/28，95%CI 51.3-86.8%）和58.3%（21/36，95%CI 40.8-74.5%），DCR为100.0%（28/28，95%CI 87.7-100.0%）和94.4%（34/36，95%CI 81.3-99.3%）。 所有23例RET突变MTC患者和7例RET融合阳性PTC患者，在RP2D接受SY-5007治疗，均可用于疗效评估，显示ORR为52.2%（12/23，95%CI 30.6-73.2%）和42.9%（3/7，95%CI 9.9-81.6%），DCR分别为91.3%（21/23，95%CI 72.0-98.9%）和100.0%（7/7， 95%CI 59.0-100.0%）。在MTC患者6.44个月（95%CI 4.60-8.37）和PTC患者6.67个月（95%CI 2.79-8.37） 的中位随访期间，均未达到中位DoR和PFS，估计的12个月PFS率为85.2%（95%CI 60.5-95.0%）MTC和100.0%（95%CI 100.0-100.0%）PTC。此外，SY-5007在初治和既往治疗患者中均表现出抗肿瘤疗效，MTC患者的ORR分别为75.0%（6/8，95%CI 34.9-96.8%）和40%（6/15，95%CI 16.3-67.7%），PTC患者的ORR分别为0.0%（0/1，95%CI 0.0-97.5%）和50.0%（3/6，95% CI 11.8-88.2%）。 SY-5007在3例基线可测量的中枢神经系统（CNS）转移的可评估患者中，表现出显著的颅内抗肿瘤疗效。根据神经肿瘤学脑转移反应（RANO-BM）标准评估，颅内ORR为66.7%（2/3，95%CI 9.4-99.2%），DCR为100.0%（3/3， 95%CI 29.2-100.0%）。在一项涉及1名63岁男性NSCLC患者KIF5B-RE 融合的病例报告中，基线时10.8mm颅内病灶在160mgBID的SY-5007治疗4周后减少了40.7%，在12周后减少了56.5%，强调了SY-5007有希望的颅内疗效。评估正在进行中，以更全面地了解其颅内疗效。 SY-5007治疗RET突变实体瘤患者的疗效 总结  04  1. 安全性评估：57.4%的患者经历了≥3级治疗相关不良事件（TRAEs），最常见的包括高血压、腹泻、高甘油三酯血症和中性粒细胞减少症。与selpercatinib和pralsetinib相比，SY-5007显示出独特的安全性和相当的AE发生率。 2. 疗效评估：SY-5007在RET融合阳性非小细胞肺癌（NSCLC）患者中显示出有希望的临床活性，无论融合伴侣和既往MKI暴露如何；在RET融合阳性NSCLC中，初治患者的客观反应率（ORR）为71.4%，既往接受过治疗的患者为58.3%，与pralsetinib和selpercatinib相当；中位随访8.28个月，中位持续反应时间（DoR）为19.9个月，中位无进展生存期（PFS）为21.1个月。 3. 特殊人群疗效：在RET改变的甲状腺髓样癌（MTC）和甲状腺乳头状癌（PTC）患者中，SY-5007显示出显著的疗效，尽管入组患者数量有限。 4. 联合治疗潜力：SY-5007作为联合治疗的候选药物，特别适合与化疗和放疗相结合，用于辅助和巩固治疗。 5. 生物标志物分析：在ctDNA可检测RET改变的患者中，SY-5007显示出57.4%的ORR，支持在这类患者中进一步研究SY-5007。 6. 耐药机制：纵向ctDNA分析显示，没有靶向RET耐药突变，而是观察到脱靶耐药机制，如旁路通路激活和DNA修复失调。 7. 未来研究方向：基于1期研究的积极结果，已经启动关键的2期研究，以进一步评估SY-5007在RET融合阳性NSCLC患者中的疗效和安全性。 参考资料： 1.Belli, C. et al. Progresses Toward Precision Medicine in RET-altered Solid Tumors. Clin. Cancer Res. 26, 6102–6111 (2020). 2.Mulligan, L. M. RET revisited: expanding the oncogenic portfolio. Nat. Rev. Cancer 14, 173–186 (2014). 声明：发表/转载本文仅仅是出于传播信息的需要，并不意味着代表本公众号观点或证实其内容的真实性。据此内容作出的任何判断，后果自负。若有侵权，告知必删！ 长按关注本公众号  粉丝群/投稿/授权/广告等 请联系公众号助手 觉得本文好看，请点这里↓